Родился в г. Нежине. С 1720 по 1728 г. обучался в школе Киевского Богоявленского монастыря и Киевской духовной академии. С 1728 по 1733 г. продолжил образование в Львовской Духовной академии. С 1733 г. - слушатель богословия в Московской славяно-греко-латинской академии. В 1739 г. пострижен в монашество и определен учителем в Александро-Невскую Духовную семинарию. В 1748 г. именным указом произведен в архимандриты с титулом члена Святейшего Синода и с назначением в Воскресенский Ново-Иерусалимский монастырь. С 1753 по 1761 г. епископ Переславля-Залесского. В это время по его инициативе началось строительство Успенского собора Горицкого монастыря. С 1761 г. - епископ Сарский и Подонский, в 1764 г. возведен в сан архиепископа Крутицкого, 18 января 1768 г. назначен архиепископом Московским. Амвросий был образованнейшим человеком своего времени. Как знаток церковной архитектуры лично руководил строительством и восстановлением храмов. Например, в 1760-е гг. им были восстановлены некоторые храмы Московского Кремля: Успенский,  Благовещенский, Архангельский. Его перевод Псалтыри с еврейского считается образцовым, с латинского перевел "Рассуждения против атеистов и натуралистов" Горация, с греческого "Послания св. Игнатия Богоносца", "Поучения" Кирилла, архиепископа Иерусалимского, "Богословие" Иоанна Дамаскина. Участвовал в переводе с английского "Опыта о человеке". Оригинальные произведения Амвросия - "Поучения", "Служба св. митрополиту Димитрию Ростовскому".
16 сентября 1771 г. Амвросий был убит разгневанной толпой в Московском Донском монастыре во время чумного бунта. Причиной послужил его запрет на целование икон.